Трансфер фактор при раке желудка

Киселевский М.В., Халтурина Е.О.

Отчет

Лаборатория клеточного иммунитета Российского Онкологического Научного центра им. Н.Н. Блохина РАМН

Рак желудка является одним из тяжелейших недугов человечества на протяжении многих веков. Ежегодная заболеваемость этой нозологической формой составляет более
1 млн. человек. Так, например, в Японии до сих пор отмечается рост заболеваемости раком желудка. Кроме того, высокие показатели заболеваемости регистрируются в Китае, Эстонии, Латвии, Новой Зеландии, России и других странах. В подавляющем большинстве стран заболеваемость раком желудка у мужчин в 2 раза выше, чем у женщин. Рак желудка относится к онкологическим заболеваниям, которые характеризуются развитием стойких, длительно текущих и трудно коррегируемых иммунодефицитов, что, в свою очередь, обусловлено особенностями оперативного лечения этого заболевания.

В настоящее время стандартом хирургического лечения рака желудка является гастрэктомия (или проксимальная резекция желудка) с лимфодиссекцией в объеме D2, элементом которой является спленэктомия. Поскольку селезенка является иммунокомпетентным органом, ее удаление ведет к сдвигу динамического равновесия в иммунной системе и усугублению иммунологической недостаточности, характерной для онкопатологии. Состояние иммунной системы у больных раком желудка было изучено в многочисленных исследованиях, которые однозначно показали, что развитие вторичного иммунодефицита значительно влияет на адекватность и эффективность иммунного ответа, уменьшает длительность безрецидивного периода. Все это обусловило необходимость комплексного подхода к иммунотерапии рака желудка после максимальной циторедукции, которая позволяет создать оптимальные соотношения клеток-эффекторов и клеток-мишеней.

Нами была изучена и оценена эффективность применения препарата «Трансфер фактор плюс», предоставленного фирмой «4 Life Research», как иммуномодулирующего средства, применяемого в составе метода комплексной адоптивной иммунотерапии рака желудка.

Материалы и методы.

Клинические испытания препарата «Трансфер фактор плюс» проведены на 25 больных раком желудка (экспериментальная группа) во 2-3 клинической стадиях заболевания, в возрасте от 41 до 70 лет. Контрольную группу составили 25 пациентов, аналогичных по полу, возрасту, нозологической форме и стадии заболевания.

Всем больным раком желудка как экспериментальной, так и контрольной групп было проведено хирургическое лечение, включавшее в себя гастрэктомию (или проксимальную резекцию желудка) с лимфодиссекцией в объеме D2, элементом которой являлась спленэктомия.

Стандартная схема иммунотерапевтического лечения, применяемая в послеоперационном периоде, включала в себя проведение адаптивной ИЛ-2/ЛАК иммунотерапии (терапия интерлейкином-2 и лимфокинактивированными киллерами – ЛАК-клетками, полученными путем экстракорпоральной активации мононуклеарных клеток крови) для стимуляции неспецифического звена иммунитета (в том числе и противоопухолевого иммунитета).

Пациенты экспериментальной группы дополнительно к стандартной схеме лечения получали препарат «Трансфер фактор плюс» по 1 капсуле 3 раза в день в течение 30 дней.

Пол

Мужчины-17

Женщины-8

Возраст

От 41 до 70 лет

Средний возраст

55 лет

Общее состояние по шкале Карновского* (KPS)

Удовлетворительное           80%      ‹KPS› 60%

15 чел.

Средней степени тяжести   60%      ‹KPS› 50%

10 чел.

Тяжелое                                                KPS=40%

0 чел.

Стадия заболевания:   ΙΙ

60%

                                      ΙΙΙ

40%

*) шкала Карновского позволяет произвести комплексную оценку общего соматического статуса пациента.

ТNМ клиническая классификация рака желудка

Т первичная опухоль

Т1 – опухоль инфильтрирует собственную пластинку слизистой оболочки или подслизистую основу;

Т2 – опухоль инфильтрирует мышечную оболочку или серозную оболочку;

ТЗ – опухоль прорастает серозную оболочку (висцеральную брюшину) без инвазии в соседние структуры (примечания 1, 2, 3);

Т4 – опухоль распространяется на соседние структуры (примечания 2, 3).

Примечания

1.Опухоль может прорастать мышечную оболочку, вовлекая желудочно-толстокишечную или желудочно-печеночную связки, или сальник без перфорации висцеральной брюшины, покрывающей эти структуры. В этом случае опухоль классифицируется как Т2. Если имеется перфорация висцеральной брюшины, покрывающей связки желудка или сальника, то опухоль классифицируется как Т3.

2.Соседними структурами желудка являются селезенка, поперечно-ободочная кишка, печень, диафрагма, поджелудочная железа, брюшная стенка, надпочечник, почка, тонкая кишка, забрюшинное пространство.

3.Внутристеночное распространение на 12-перстную кишку или пищевод классифицируется по наибольшей глубине инвазии при всех локализациях, включая желудок.

N регионарные лимфатические узлы

N0 – нет признаков метастатического поражения регионарных лимфатических узлов

N1 – имеются метастазы в перигастральных лимфатических узлах не далее 3 см от края первичной опухоли

N2 – имеются метастазы в перигастральных лимфатических узлах на расстоянии более 3 см от края первичной опухоли или лимфатических узлах, располагающихся вдоль левой желудочной, общей печеночной, селезёночной или чревной артерий.

М отдаленные метастазы

М0 – нет признаков отдаленных метастазов

Исследования проводили до операции, до лечения и через один месяц после комплексного лечения. Общее состояние пациентов оценивали по шкале Карновского.

Лабораторно-клинические исследования включали определение субпопуляций лимфоцитов крови, концентраций сывороточных иммуноглобулинов классов A, M, G, уровней спонтанной и индуцированной продукции цитокинов – фактора некроза опухоли-α и интерлейкина-1β (ФНО-α и ИЛ-1β), уровня интерферона-α (ИФ-α) в сыворотке крови.

Субпопуляции лимфоцитов крови исследовали с помощью идентификации мембранных маркеров различных клонов иммунокомпетентных клеток с использованием моноклональных антител отечественного производства («МедБиоСпектр», Москва).

Цитокиновый профиль исследован на 50 образцах крови. Пробы крови, взятые у пациентов контрольной и экспериментальной групп до операции, до лечения и после лечения, центрифугировали при 3000 об/мин в течение 10 минут. Отобранную сыворотку хранили при -70°С. Уровень цитокинов определяли методом твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) с помощью коммерческих тест-систем «ProCon» в диапазоне детектируемых концентраций от 10-20 до 1000-2000 пг/мл.

Уровень иммуноглобулинов в сыворотке крови определяли методом радиальной иммунодиффузии в геле по Манчини.

Результаты и их обсуждение.

В клинической картине у больных раком желудка 2-3 стадии до начала проведения комплексной иммунотерапии в послеоперационном периоде преобладал интоксикационный синдром, который проявлялся в жалобах на общую слабостью, повышенную утомляемость, дневную сонливость, отсутствие аппетита, головокружение, головные боли.

При оценке параметров иммунного статуса было выявлено, что в исходном состоянии у большинства пациентов имел место иммунодефицит различной степени выраженности, который усугубился после проведения оперативного лечения. Отмечалось существенное снижение содержания Т-лимфоцитов, преимущественно за счет снижения CD4+ (Т-хелперы/индукторы) и CD8+ (Т-супрессоры/цитотоксические), а также изменение иммунорегуляторного индекса в сторону его снижения. При определении уровня сывороточных иммуноглобулинов было выявлено существенное снижение уровня  иммуноглобулина М. При анализе результатов спонтанной и индуцированной продукции цитокинов было выявлено увеличение их концентрации в сыворотке крови и супернатантах после операции, что свидетельствует о сохранении способности к системному цитокиновому ответу на хирургическую травму. По данным современной отечественной и зарубежной литературы выраженный и трудно коррегируемый иммунодефицит, развивающийся у данной категории больных после проведения стандартного хирургического лечения, является причиной увеличения инфекционных осложнений в послеоперационном периоде, оказывает отрицательное влияние на продолжительность безрецидивного периода жизни и повышает риск метастазирования.

В клинических и биохимических анализах крови существенных изменений не наблюдалось, кроме неспецифических проявлений в виде анемии легкой и средней степени тяжести, лимфоцитопении, повышении СОЭ.

Исследования, проведенные после окончания курса комплексной терапии с использованием «Трансфер фактора плюс», показали положительное влияние проводимой терапии на показатели иммунного, интерферонового и цитокинового статусов и клиническое течение заболевания. У 35% больных раком желудка отмечалась положительная динамика. Увеличилось содержание CD3+, CD4+, CD8+ субпопуляций лимфоцитов крови, значительно повысилось содержание NK-клеток в крови, что свидетельствует об активации клеточного звена иммунной системы. В исследуемых показателях гуморального звена иммунитета также отмечается положительная динамика, которая выражается в нормализации уровней спонтанной продукции ФНО-α и ИЛ-1β. Концентрация ИФ-α в сыворотке крови осталась прежней.

В клинической картине заболевания появилась положительная динамика в виде уменьшения степени выраженности интоксикационного синдрома, что проявилось в виде улучшения общего самочувствия, повышении аппетита, исчезновении выраженной слабости и быстрой утомляемости. Послеоперационный период протекал без осложнений. Улучшилась оценка общего состояния по шкале Карновского. За время проведения курса комплексной иммунотерапии, в состав которой входил препарат «Трансфер фактор плюс», рецидивирования заболевания не наблюдалось.

В целом можно отметить хорошую переносимость препарата «Трансфер фактор плюс», достаточно высокую его эффективность в составе комплексной иммунотерапии онкологических заболеваний, что позволяет рекомендовать его применение в широкой клинической практике.

Выводы: Учитывая результаты проведенного исследования, следует отметить, что применение БАД «Трансфер фактор плюс» в комплексной (ИЛ-2/ЛАК) терапии у онкологических больных после радикальных хирургических операций с явлениями выраженного иммунодефицита в 35% случаев приводит к нормализации показателей иммунного статуса и улучшению общего состояния пациентов. Для оптимизации лечебно-профилактического действия «Трансфер фактор плюс» рекомендуется увеличить дозу и кратность курсов БАД. Для оценки длительности иммунокоррегирующего действия «Трансфер фактор плюс» у исследованной группы больных целесообразно дополнительное изучение показателей иммунитета через 3 месяца после окончания курса.

Таблица №1. Изменение сывороточных концентраций иммуноглобулинов у больных раком желудка в зависимости от вида лечения.

Цитокины (пкг/мл)

Больные раком желудка ΙΙ – ΙΙΙ стадии

Экспериментальная группа (n = 25)

Контрольная группа (n = 25)

До операции

До лечения

После лечения

До операции

До лечения

После лечения

спон

стим

спон

стим

спон

стим

спон

стим

спон

стим

спон

стим

ИЛ-1b

117,3

±63,5

376,2

±201

204,6

±74,8

378,6

±101,4

482,4

±190,5

74,9

± 68,3

456,3

±120,3

93,60

±74,2

110,2

±83,9

56,3

±22,9

293,1

±141,7

ФНО-a

45,5

±15,3

182,3

±140,8

21

±18,7

342,7

±201

144,5

±74,8

62,9

±59,2

210,5

±69,8

27,43

±20,9

180,9

±150,8

55,7

±39,2

217,6

±113,2

ИФ-α

215

±96,3

295,5

±108

306,4

±208

380,4

±234,2

299,5

±156

186,3

±99,7

Показатель

Норма (%)

Экспериментальная группа

Контрольная группа

До операции

До лечения

После лечения

До операции

До лечения

После лечения

CD3+(Т-лимфо-циты)

60-75

66,3±11,2

43,3±19,8

60,4±6,9

62,3±11,5

34,1±14,5

40,7±3,2

CD4+(Т-хелпе-ры/индукторы)

35-46

36,6±10,9

23,6±18,5

26±6,9

41±13,0

17,3±13,1

18,2±9,7

CD8+(Т-супрес-соры/цитотокси-ческие)

25-30

27,1±4,6

18,6±69,9

36,2±2,7

24,7±10,2

22,3±7,28

22,6±1,8

CD20+(В-лим-фоциты)

5-15

7,3±3,2

6,6±1,6

8,0±3,9

6,6±2,2

8,8±2,66

7,4±1,56

HLA-DR+(В-лимфоциты, актив. Т-лим-фоциты)

7-15

9,3±3,1

5,7±3,0

17,5±11,1

7,7±2,1

11,4±6,10

13,3±0

CD38+(активи-рованные лимфоциты)

24-40

37,6±10,1

38±13,6

37,6±9,2

36,7±14,8

27,4±16,2

33,4±10,4

CD25+(α-цепь рецептора ИЛ-2)

0-5

3,1±2,96

1,5±1,2

1,8±0,8

2,7±1,96

1±1,06

1,2±0,4

CD16+(NK-клетки)

10-20

21±7,8

24,5±11,9

30,3±4,5

18,9±10,6

33,1±2,7

38,4±1,3

CD4+/CD8+(им-мунорегулятор-ный индекс)

1,2-2,4

1,3±0,39

1,3±0,9

0,71±0,2

1,6±1,0

0,6±0,6

0,83±0,5