Игх желудка исследование что это такое
Иммуногистохимия, или иммуногистохимический анализ — исследование, во время которого в образцах ткани с помощью антител выявляют определенные молекулы. Этот метод диагностики нашел широкое применение в онкологии.
Немного теории и истории. Для того чтобы обнаруживать и уничтожать чужеродные вещества, иммунная система использует особые молекулы — антитела. Они отличаются специфичностью: каждое антитело может связываться строго с определенным антигеном.
В 1941 году американский иммунолог Альберт Кунс впервые решил использовать антитела в лаборатории, чтобы «распознавать» с помощью них белки бактерий. В 1984 году биохимик из Аргентины Сезар Мильштейн получил Нобелевскую премию за то, что создал гибрид опухолевой клетки с лимфоцитом, которая могла синтезировать моноклональные антитела. После этого началось производство моноклональных антител для диагностических и лечебных целей.
В 1994 г. С. Тэйлор применил иммуногистохимический анализ, чтобы проверить 20 000 опухолей, и обнаружил, что диагнозы в половине случаев были ошибочными. Иммуногистохимия зарекомендовала себя как эффективный метод диагностики.
Какие задачи в онкологии помогает решать иммуногистохимия?
Иммуногистохимический анализ помогает врачам-онкологам:
- Отнести злокачественную опухоль к тому или иному типу.
- Выяснить, в каких генах опухолевых клеток произошли мутации, какие белки способствуют прогрессированию рака.
- Выявить первичную опухоль и ее метастазы.
- Определить, произошла ли злокачественная трансформация клеток.
- Определить прогноз для пациента.
- Разобраться, поможет ли в данном случае таргетная терапия.
- Определить, чувствительны ли опухолевые клетки к химиотерапии, лучевой терапии.
Как это работает?
Иммуногистохимия бывает прямой и непрямой. В первом случае используют один вид антител, которые должны вступить в связь с определенной молекулой-мишенью. Если молекула-мишень присутствует в ткани, и реакция произошла, опухолевая ткань окрашивается:
- Чаще всего к антителу присоединяют фермент, например, пероксидазу. Этот фермент катализирует химическую реакцию, которая приводит к изменению цвета.
- Иногда к антителу присоединяют флюоресцин или родамин, при этом окрашивание выявляют с помощью флюоресцентной микроскопии.
- всего применяют непрямую иммуногистохимию. При этом используют два антитела. Одно соединяется с антигеном, второе — с полученным комплексом антиген-антитело. Маркер, который вызовет изменение цвета, связывают со вторым антителом.
Непрямой метод имеет некоторые преимущества:
- Он обладает более высокой чувствительностью, потому что с одним первичным антителом (тем, которое связывается с белком-мишенью) может связаться несколько вторичных антител.
- Исследование занимает немного времени: для того, чтобы произошла реакция, нужно примерно 3 часа.
- Непрямая иммуногистохимия требует небольшого количества антител. Например, вторичное антитело, направленное на иммуноглобулины кролика, будет реагировать на любое первичное антитело «кроличьего» происхождения. Не нужно создавать много разных видов вторичных антител с окрашивающей или флуоресцентной меткой.
Как проводят исследование?
Для того чтобы выполнить иммуногистохимический анализ, нужно получить опухолевую ткань, то есть провести биопсию. В качестве материала можно использовать столбик ткани, полученный во время трепан-биопсии, фрагмент тканей или даже целый орган, удаленный во время операции.
Образец ткани фиксируют с помощью формальдегида (иногда используют метанол, ацетон и другие фиксаторы — это зависит от того, какой антиген нужно выявить, и реагирует ли он с теми или иными фиксаторами) и погружают в парафин. Парафинизация помогает законсервировать ткань, сохранить ее структуру на длительное время.
Затем ткань, помещенную в парафин, нарезают с помощью специального инструмента — микротома — на слои толщиной 3–5 мкм. Эти тонкие срезы помещают на стекло, покрытое, специальным клеем.
Некоторые образцы слишком чувствительны к реагентам, которые применяют во время вышеописанной процедуры. Их нельзя помещать в парафин. Такие ткани замораживают жидким азотом. Этим альтернативным методом пользуются редко, только в случае необходимости, так как у заморозки есть некоторые недостатки: она делает изображение под микроскопом не таким четким, требует специальных условий хранения образцов. Фиксацию ткани в таких случаях проводят уже после нанесения на стекло и размораживания, ацетоном или формальдегидом.
После того как срезы нанесены на стекло, из них нужно удалить весь парафин, иначе антитела не прореагируют с антигеном. Эта процедура называется депарафинизацией. Ее проводят с помощью ксилола. Затем выполняют еще некоторые подготовительные процедуры, чтобы антитела могли успешно прореагировать с нужными антигенами, и, наконец, проводят непосредственно иммуногистохимический анализ. Обработанную антителами ткань рассматривают под микроскопом, чтобы проверить, окрасилась ли она.
Какие молекулы-мишени выявляют во время иммуногистохимии?
Количество возможных мишеней измеряется сотнями. Перед исследованием врач должен понимать, что он ищет, и использовать соответствующие антитела. В онкологии мишенями являются опухолевые маркеры — вещества, которые в здоровых клетках отсутствуют вообще или присутствуют в значительно меньшем количестве. Вот некоторые примеры:
- Рецепторы к эстрогенам и прогестерону помогают идентифицировать гормонально-позитивный рак молочной железы и разобраться, помогут ли женщине гормональные препараты.
- Простатспецифический антиген (ПСА) имеет значение в диагностике рака простаты.
- Альфа-фетопротеин — присутствует в гепатоцеллюлярной карциноме (рак печени).
- Цитокератины помогают в диагностике рака и некоторых сарком (злокачественных опухолей соединительной ткани).
- Фермент CD10 (CALLA) связан с карциномой почек, лимфобластным лейкозом.
Какова роль иммуногистохимии в современной онкологии?
Иммуногистохимический анализ помогает изучить характеристики злокачественной опухоли, которые не могут выявить другие методы диагностики. Зачастую это играет важную роль в уточнении диагноза и назначении правильного лечения. Врач может определить, какие комбинации препаратов будут наиболее эффективны для конкретного больного, иными словами, реализуется принцип персонализированного лечения. Зачастую это помогает улучшить результаты, подобрать эффективное лечение для пациентов, которым не помогает стандартная терапия.
Источник
Иммуногистохимические исследования или иммуногистохимия (сокращенно ИГХ) — это анализ, который применяется для диагностики различных заболеваний и нашел особенно широкое применение в онкологии. С помощью него обнаруживают маркеры — вещества (белки),которые в больших количествах вырабатываются опухолевыми клетками. Это помогает врачам решать различные диагностические задачи.
Суть исследования ИГХ в том, что к образцу опухолевой ткани добавляют антитела, которые распознают искомое вещество как антиген и связываются с ним. Благодаря этому соответствующие участки опухолевой ткани окрашиваются, и их можно обнаружить при исследовании под микроскопом.
Наш эксперт в этой сфере:
Заместитель главного врача по лечебной работе,
врач-онколог, хирург, к.м.н.
Позвонить врачу
ИГХ — относительно простой, недорогой и в то же время очень эффективный метод диагностики, это незаменимый инструмент для
врачей-онкологов
при многих типах рака. Вы можете пройти иммуногистохимию в Москве в клинике Медицина 24/7.
Для чего применяют анализ ИГХ в онкологии?
Врачам-онкологам иммуногистохимия помогает решать следующие задачи:
- Уточнить диагноз, вид и подвид злокачественной опухоли, если этого не позволяет сделать цитологическое и гистологическое исследование. Например, существует около 70 разновидностей лимфом и лейкозов. Чаще всего их диагностируют с помощью иммуногистохимии. Иногда дополнительно требуется проведение молекулярно-генетического исследования.
- Выявить природу и локализацию основной опухоли, если удалось обнаружить только отдаленные метастазы, и неясно их происхождение.
- Подобрать оптимальную схему терапии. С помощью иммуногистохимического анализа можно оценить чувствительность злокачественной опухоли к тем или иным лекарственным препаратам, обнаружить «молекулярные мишени» для противоопухолевых средств.
- Оценить степень злокачественности опухолевых клеток, прогноз.
- Дифференциальная диагностика: исследование помогает отличить злокачественные опухоли от доброкачественных новообразований, неопухолевых процессов.
- Диагностировать множественные опухоли. Иммуногистохимию рака применяют, когда у пациента имеется подозрение на одновременное наличие двух и более разных типов злокачественных опухолей.
Как проводят анализ?
Для того чтобы провести исследование на различные опухолевые маркеры, врач должен выполнить биопсию — получить фрагмент ткани злокачественной опухоли и отправить его в лабораторию. Там материал особым образом подготавливают (с помощью парафинизации или заморозки),обрабатывают соответствующими антителами и изучают под микроскопом. Иммуногистохимия опухолей позволяет не только выявить искомое вещество, но и оценить его локализацию в ткани, судить о количестве.
После того как исследование завершено, лечащий врач получает из лаборатории заключение. Сроки проведения анализа установлены пунктом 24 Приказа Минздрава России № 179н от 24 марта 2016 г. Если опухолевую ткань исследуют на 5 разных маркеров или меньшее количество, результат должен быть готов в течение одной недели, если на большее количество — в течение 15 дней.
При каких типах рака чаще всего применяют иммуногистохимические исследования?
Иммуногистохимическое исследование биопсийного материала помогает выявлять разные виды опухолевых маркеров. Вот некоторые:
- При раке молочной железы: рецепторы к гормонам (эстрогенам, прогестерону),белок-рецептор HER2.
- При карциноидах (нейроэндокринных опухолях): рецепторы к гормону соматостатину типов 2А и 5.
- При немелкоклеточном раке легкого (НМРЛ) и некоторых других типах рака:PD-L1, ROS1, ALK.
- При раке толстой кишки и некоторых других злокачественных опухолях: микросателлитная нестабильность.
Наши врачи ответят на все ваши вопросы
Оставьте свой номер телефона
Иммуногистохимические исследования при раке молочной железы
При раке молочной железы самое большое значение имеют три белка: рецептор к эстрогенам, рецептор к прогестерону и HER2. Присутствие этих молекул на поверхности раковых клеток делает их чувствительными к определенным лекарственным препаратам. Если по результатам иммуногистохимии ни одна из этих молекул не обнаружена, диагностируют тройной негативный рак молочной железы. Он отличается более агрессивным течением, его сложнее лечить.
- ER (рецептор эстрогенов) связывается с женскими половыми гормонами и стимулирует деление опухолевых клеток. У таких пациентов эффективны гормональные препараты, которые блокируют эффекты эстрогенов.
- PR (рецептор прогестерона) связывается с гормоном прогестероном и приводит к аналогичному эффекту. Не существует лекарственных препаратов, которые были бы направлены против PR, однако, определение этого белка помогает правильно оценить прогноз.
- HER2 — белок из семейства рецепторов эпидермального фактора роста. Если на поверхности клеток присутствует большое его количество, это стимулирует их бесконтрольные деления. Рецептор HER2 можно заблокировать с помощью таргетного препарата трастузумаба (Герцептина).
В лаборатории содержание этих веществ в опухолевых клетках оценивают с помощью специальных шкал:
| ER и PR | HER2 |
Результаты:
| Результаты:
|
Интерпретация результата:
| Интерпретация результата:
|
Иммуногистохимические исследования при раке легкого
При раке легкого с помощью иммуногистохимии можно уточнить гистологический тип злокачественной опухоли. Разные подтипы клеток при немелкоклеточном раке легкого могут экспрессировать различные маркеры:
- Большинство аденокарцином (злокачественные опухоли из клеток, вырабатывающих слизь): цитокератин 7 (СК7),тиреоидный транскрипционный фактор-1 (TTF-1),опухолевый белок p63, цитокератин 20 (CK20),опухолевый белок p63, Е-кадгерин.
- Плоскоклеточный рак (из плоского эпителия, который выстилает дыхательные пути): CK5/6, p63, 34bE12. TTF-1 и CK7 при плоскоклеточном раке легкого обычно не обнаруживают.
Также анализ иммуногистохимии при раке легкого может потребоваться для обнаружения продуктов «неправильных» генов, которые могут стать мишенями для таргетных препаратов. Это помогает разобраться, стоит ли назначить пациенту данные препараты:
- EGFR — рецептор эпидермального фактора роста, который находится на поверхности опухолевых клеток и заставляет их бесконтрольно размножаться. В данном случае могут быть эффективны таргетные препараты: эрлотиниб (Тарцева),афатиниб (Гилотриф),гефитиниб (Иресса),осимертиниб (Тагриссо),дакомитиниб (Визимпро),нецитумумаб (Portrazza).
- ALK — мутация в этом гене встречается при немелкоклеточном раке легкого примерно в 5% случаев. Применяют таргетные препараты: кризотиниб (Ксалкори),церитиниб (Зикадия),алектиниб (Алекенза),бригатиниб (Алунбриг),лорлатиниб (Лорбрена).
- ROS1 — ген, мутации в котором возникают при немелкоклеточном раке легкого в 1–2% случаев. При этом помогают такие таргетные препараты, как кризотиниб (Ксалкори),церитиниб (Зикадия),лорлатиниб (Лорбрена),энтректиниб (Розлитрек).
- PD-L1 — белок, который связывается с молекулой PD1 на поверхности T-лимфоцитов, подавляет их активность, мешает атаковать опухолевые клетки. Если в опухолевой ткани обнаружен этот маркер, могут быть назначены иммунопрепараты из группы ингибиторов контрольных точек.
Мы вам перезвоним
Оставьте свой номер телефона
Иммуногистохимическое исследование при раке матки
Иммуногистохимия эндометрия помогает выявить некоторые важные опухолевые маркеры:
- Рецепторы к эстрогенам (ER) и прогестерону (PR): играют важную роль в прогнозе и выборе тактики лечения.
- Маркеры пролиферативной активности (интенсивности деления опухолевых клеток): антиген Ki-67, ядерный антиген пролиферирующих клеток (PCNA). По пролиферативной активности опухоли можно косвенно судить о степени ее злокачественности, прорастании в соседние ткани, наличии отдаленных метастазов.
- Маркеры апоптоза — запрограммированной клеточной смерти. В этом процессе принимают участие многие молекулы, если он нарушается, то клетка становится «бессмертной» и может бесконтрольно размножаться. Наибольшее значение имеют опухолевые маркеры: bax, bcl-2, c-myc, р53, с-erbB-2HER-2neu.
- Маркеры ангиогенеза — вещества, которые свидетельствуют о том, что злокачественная опухоль активно «выращивает» для себя новые кровеносные сосуды. В качестве маркеров используют антигены CD31 и CD34, VIII фактор свертывания крови.
- Снижение активности гена PTEN. В норме белок, который он кодирует, должен останавливать размножение клеток и запускать апоптоз — запрограммированную клеточную смерь. При предраковых состояниях и раке эндометрия (слизистой оболочки матки) активность этого белка зачастую снижена.
Иммуногистохимические исследования при раке толстой кишки
Некоторые опухолевые маркеры, определяемые с помощью иммуногистохимии, помогают диагностировать колоректальный рак при метастазах с неизвестной локализацией первичной опухоли:
- Ядерный транскрипционный фактор CDX2 высоко специфичен для клеток кишечного эпителия.
- VIL1 — специфичен для аденокарцином желудочно-кишечного тракта.
- GPA33 — ген, кодирующий белок, который экспрессируется в большинстве случаев при колоректальном раке.
- SATB2 — белок, обладающий высокой специфичностью и являющийся хорошим маркером первичного и метастатического колоректального рака.
- Другие маркеры: mCEA, CA19-9, кальретинин, COX-2, CDH17, CK20, MOC-31 (EPCAM),MUC2, CK7.
Зачастую при раке толстой и прямой кишки бывает важно определить микросателлитную нестабильность и нарушение репарации в четырех генах: MLH1, PMS2, MSH2 и MSH6. Это помогает в оценке прогноза и диагностике синдрома Линча (наследственного неполипозного рака толстой кишки) — генетического заболевания, при котором у больного с более высокой вероятностью и в более раннем возрасте (средний возраст — 37 лет) развивается рак кишечника, некоторые другие злокачественные опухоли.
Возможны следующие результаты иммуногистохимического исследования на синдром Линча при колоректальном раке:
- Все 4 белка присутствуют в опухолевой ткани: наиболее распространенная ситуация, встречается у 80% пациентов с раком толстой и прямой кишки. Среди этих больных синдром Линча встречается очень редко.
- Отсутствует один или более белков: такая ситуация встречается у 20% пациентов. У них высока вероятность синдрома Линча.
- Отсутствуют белки MLH1 и PMS2: такая ситуация встречается в 15% случаев. У 20% этих пациентов имеется синдром Линча.
- Отсутствует только белок PMS2, MSH2 или MSH6: встречается в 5% случаев, у большинства этих пациентов имеется синдром Линча.
Мы вам перезвоним
Оставьте свой номер телефона
Иммуногистохимические исследования при меланоме
Онколог назначает иммуногистохимическое исследование, когда обнаружена меланома на любой части тела, пигментированный метастаз, который может иметь отношение к меланоме, пигментный невус (родинка),который внешне очень похож на злокачественную опухоль, но при обычном гистологическом исследовании в нем не удается обнаружить опухолевые клетки.
Исследуют маркеры:
- Ki-67 — помогает оценить пролиферативную активность опухоли, прогноз.
- р53 — оценка активности деления клеток.
- HMB-45 — оценка функции пигментных клеток (меланоцитов).
- bcl-2 — оценка вероятности того, что опухоль метастазирует.
- S-100 — высокоспецифичный для меланомы маркер, который помогает отличить ее от доброкачественных образований.
Наши врачи ответят на все ваши вопросы
Оставьте свой номер телефона
Стоимость анализа в клинике Медицина 24/7
В клинике Медицина 24/7 иммуногистохимические анализы при раке и ряде других заболеваний выполняются методом флюоресцентной гибридизации in situ. Антитела, присоединившиеся к антигенам, дают при осмотре под микроскопом свечение. Цены на иммуногистохимию в нашей клинике представлены ниже.
Материал подготовлен заместителем главного врача по лечебной работе клиники «Медицина 24/7», кандидатом медицинских наук Сергеевым Петром Сергеевичем.
Источники:
- Бейсенаева А. Р. Роль иммуногистохимического исследования в онкологии // Медицина и экология. 2015. №2 (75).
- Непомнящих Л. М., Лушникова Е. Л., Вержбицкая Н. Е., Мительман Ю. М., Жук А. Г. Иммуногистохимические исследования в онкоморфологии // Сибирский онкологический журнал. 2006. №3.
- Жук А. Г., Ившина Ю. А., Мительман Ю. М. Иммуногистохимическое исследование гиперпластических процессов и рака молочной железы // Сибирский онкологический журнал. 2006. №3.
Источник